БАДАН

ИЗУЧЕНИЕ ФЛАВОНОИДОВ КРАСНЫХ ЛИСТЬЕВ БАДАНА ТОЛСТОЛИСТНОГО (BERGENIA CRASSIFOLIA (L.) FITSCH., ПРОИЗРАСТАЮЩЕГО НА АЛТАЕ Л.М. Федосеева, Е.В. Тимохин Алтайский государственный медицинский университет, Барнаул

Целью работы является изучение и идентификация флавоноидов красных листьев бадана толстолистного. В результате проведенных исследований на основании цветных реакций, бумажной хроматографии и спектрофотометрического определения установлена сумма флавоноидов, идентифицированы апигенин, кемпферол, кверцетин и рутин. Количественное содержание суммы флавоноидов определено спектрофотометрическим методом и в пересчете на рутин составило 1.30%.

Введение. Флавоноиды являются одной из самых распространенных групп фенольных соединений, производные бензо-γ-пирона, в основе которых лежит фенилпропановый скелет. Большинство из них можно рассматривать как производные хромона или хромана, содержащие в положении 2, 3 или 4 арильный радикал.

Флавоноиды в большем или меньшем количестве содержатся почти во всех растениях. Многие являются растительными пигментами и выполняют роль фильтров, защищая ткани от вредного влияния ультрафиолетовых лучей. Они участвуют в дыхании растений, а совместно с аскорбиновой кислотой – в энзиматических окислительно-восстановительных процессах.

Флавоноидам присуща высокая биологическая активность, обусловленная присутствием в молекуле активных фенольных гидроксильных и карбонильных групп, которые подвергаются различным биохимическим изменениям, принимают участие в ряде физиологических процессов и обладают широким спектром фармакологической активности. Флавоноиды оказывают мочегонное, антимикробное, противовоспалительное, противоопухолевое действие и др. [1].

Нами установлено, что листья бадана толстолистного (Bergenia crassifolia (L.) Fitsch.) семейства камнеломковых (Saxifragaceae) и препараты из них обладают мочегонной, антимикробной и противовоспалительной активностью [2–4].

В результате фитохимических исследований бадана толстолистного, изучен комплекс фенольных соединений, состоящий из простых фенолов, дубильных веществ, кумаринов, флавоноидов. Целью настоящей работы является изучения флавоноидов в красных листьях бадана.

Для исследований использовали красные листья бадана, собранные в Шеболинском районе республики Алтай в 1996–1998 гг.

Экспериментальная часть. Для получения извлечения 1 г измельченного сырья помещали в колбу вместимостью 25 мл и заливали 70%-ным этиловым спиртом. Проводили настаивание на водяной бане в течение 10 мин. После охлаждения полученное извлечение фильтровали через бумажный фильтр и проводили качественные реакции на флавоноиды (5). С целью подтверждения результатов качественных реакций дальнейшую идентификацию флавоноидов проводили бумажной хроматографией восходящим способом в системах растворителей: бутанол-уксусная кислота-вода (БУВ) (4 : 1 : 5), 60% уксусная кислота. Извлечение готовили следующим образом: 5 г измельченного сырья экстрагировали трижды по 50 мл 70% этанолом на водяной бане по 1 час. Затем извлечение обрабатывали диэтиловым эфиром. Эфирное извлечение упаривали и наносили на хроматограмму. В качестве свидетелей использовали растворы стандартов рутина, кверцетина, кемпферола, апигенина. Полученные хроматограммы высушивали при комнатной температуре и просматривали при дневном свете, затем в ультрафиолетовом свете до и после обработки хромогенными реактивами, отмечая изменение окраски зон флуоресценции [6].
Количественное определение флавоноидов провели спектрофотометрическим методом [7].

Обсуждение результатов. На основании проведенных качественных реакций сделали предположение о наличии в красных листьях бадана флавонов, флавонолов, 5-оксифлавонолов, 5-оксифлавонов. 

В результате проведения бумажной хроматографии в системе БУВ (4:1:5) обнаружены два пятна, в УФ свете имеющие коричневую флуоресценцию. После обработки парами аммиака первое пятно приобрело желто-оранжевую флуоресценцию, после обработки 5%-ным спиртовым раствором алюминия хлорида – желтую флуоресценцию, значение Rf – 0,71; второе пятно после обработки парами аммиака и 5%-ным спиртовым раствором алюминия хлорида имело желтую флуоресценцию, Rf – 0.58, совпало с раствором свидетеля рутина. Установлено, что флавоноиды находятся в виде гликозидов. Для определения агликонов гликозидов проведен кислотный гидролиз с 10%-ным раствором соляной кислоты и последующей обработкой этиловым эфиром. Эфирное извлечение хроматографировали со стандартным раствором кверцетина. При изучении хроматограммы в УФ свете наблюдали несколько пятен, одно из них по окраске (зеленая флуоресценция) и величине Rf – 0.75 совпало со «свиделелем» кверцетина.

В результате проведения бумажной хроматографии установили лучшую разделяющую способность имеет 60% уксусная кислота, выявлено 7 пятен.

Первое пятно в УФ свете имело коричневую флуоресценцию, которая после обработки парами аммиака и 5%-ным спиртовым раствором хлорида алюминия перешла в желтую, Rf – 0.66 и совпало со “свидетелем” апигенина.

Третье пятно имело желтую окраску в видимой области и в УФ свете, сохраняющуюся после обработки парами аммиака и 5%-ным спиртовым раствором алюминия хлорида, значение Rf – 0.41 и совпало со «свидетелем» кверцетина.

Четвертое пятно имело желтую флуоресценцию пятна в УФ-свете и после обработки хромогенными реактивами, Rf – 0.50 и совпало со “свидетелем” кемпферола.

Шестое пятно имело коричневую флуоресценцию в УФ-свете, переходящую в коричнево-красную после обработки парами аммиака, Rf – 0.75 и совпало со «свидетелем» рутина.
Проведя бумажную хроматографию, полученные пятна элюировали этиловым спиртом и снимали спектральные кривые поглощения в УФ областях спектра в диапозоне длин волн от 190 до 380 нм. Параллельно снимали спектры стандартных образцов апигенина, кемпферола, кверцетина, рутина. В результате получили спектральные кривые с максимумами поглощения: апигенина – 268, 337 нм; кемпферола – 269, 329 нм; кверцетина – 256, 303 нм; рутина – 260, 372 нм. Максимумы поглощения спектральных кривых исследуемых растворов и стандартных образцов совпали.

Количественное содержание флавоноидов красных листьев бадана проводили спектрофотометрическим методом. В пересчете на рутин сумма флавоноидов составила 1.30±0.04%.

Выводы. В результате проведенных исследований на основании цветных реакций, бумажной хроматографии и спектрофотометрического определения установлена сумма флавоноидов красных листьев бадана толстолистного, идентифицированы апигенин, кемпферол, кверцетин и рутин.
Количественное содержание суммы флавоноидов проведено спектрофотометрическим методом, в пересчете на рутин составило 1.30%.

Список литературы:
1. Растительные лекарственные средства / Под ред. Н.П. Максютиной. Киев, 1985.
2. Брюханов В.М., Федосеева Л.М. Влияние бадана и толокнянки на функцию почек у крыс // Регуляция водносолевого обмена. Вып. VII. Барнаул, 1987. С. 56–61.
3. Федосеева Л.М. Фармакологическая активность препаратов из листьев бадана // Тез. докл. Всероссийской научно-практической конф. молодых ученых. Куйбышев, 1988. С. 212–213.
4. Федосеева Л.М.. Воробьева В.М., Юрова В.А, Госсен И.Е. Разработка лекарственнной формы для фиксации съемных протезов // Актуальные проблемы медицины и фармации: Мат. 64-й науч. конф. Курск, 1999. С. 249–251.
5. Шинкоренко А.Л., Бандюкова В.А., Казаков А.Л. Методы исследования природных флавоноидов. Пятигорск, 1977.
6. Георгиевский В.П., Рыбаченко А.И., Казаков А.Л. Физико-химические и аналитические характеристики флавоноидных соединений. Ростов, 1988.
7. Смирнова Л.П., Первых Л.Н. Количественное определение суммы флавоноидов в цветках бессмертника песчаного // Химико-фармацевтический журнал. №6. 1998. С. 35–38.